En los últimos años ha aumentado el interés en el empleo de hongos y levaduras para la producción de proteasas en cultivo sólido. Yarrowia lipolytica es una levadura no patógena que ha sido reportada como excelente productora de proteasas. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto del pH, la temperatura y la fuente de proteína y carbohidratos en la producción de proteasas por Y. lipolytica en cultivo sólido. Se evaluó el uso de harina de pescado (HP) y harina de soya (HS) como fuente de proteína y carbohidratos a tres niveles de pH (5,7 y 9) y tres temperaturas (40, 45 y 50 ºC). Las condiciones óptimas y fuente sustrato para obtener la máxima producción enzimática se definieron estadísticamente. El valor de pH ejerce el mayor efecto en la producción de proteasas, la máxima actividad enzimática (105 UI/mL) se obtuvo utilizando HS a pH de 7 y 45 °C a las 24-h de cultivo. Se alcanzó una reducción del 73 % en el tiempo de proceso con respecto a lo reportado previamente. A harina de soya es un sustrato económico para la producción de proteasas por Y. lipolytica en cultivo sólido.